Чт

14

апр

2016

ПЛОДЫ ДЕРЕВА ДЖАМБОЛАН (Eugenia jambolana) ПОДАВЛЯЮТ ОБЫЧНЫЕ И СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ РАКА ТОЛСТОЙ КИШКИ

Различные научные коллективы ранее уже характеризовали анти-раковые свойства биологически активных антоцианов из разных растений. Eugenia jambolana - это тропическое растение с плодами богатыми антоцианами. Поэтому это растение было выбрано в качестве источника антоцианов для изучения их влияния на клетки рака толстой кишки. Кроме того, последние данные свидетельствуют о том, что раковые стволовые клетки толстой кишки усиливают устойчивость к химиотерапии, стимулируют рецидив опухоли и способствуют неблагоприятному прогнозу.

ИССЛЕДОВАНИЕ (перевод автоматический без адаптации)
Авторы: Университет штата Пенсильвания (США)
Дата: февраль 2016
Источник: www.ncbi.nlm.nih.gov

Целями данного исследования были: 1) характеризующие профиль антоцианов из сливы java с использованием ВЭЖХ-МС; и 2) определить антипролиферативные (сотовый подсчета и МТТ) и Pro-апоптоза (tunel и каспазы 3/7 гло анализа) свойства сливы java, экстракт плодов (JPE) с помощью НСТ-116 клеток линии рака толстой кишки и прямой кишки ЦОК (положительный для CD 44, CD с 133 и ALDH1b1 маркеры). ВЭЖХ-МС анализ показал, что JPE содержит множество антоцианов в том числе из глюкозидов дельфинидина, цианидин, petunidin, пеонидин и мальвидин. JPE антоцианы подавлена (р < 0.05) распространение в НСТ-116 клеток и повышенным (р < 0.05) апоптоз в обоих НСТ-116 клеток и толстой кишки ЦОК. JPE и подавили stemness в ЦОК толстой кишки, как оценивали с помощью формирования колонии теста. Эти результаты требуют дальнейшей оценки противораковой активности JPE, и ее молекулярные механизмы, используя доклинических моделях рака толстой кишки.

1. Введение

Рак толстой кишки является второй ведущей причиной смертности в Соединенных Штатах. На 2014 год, американское онкологическое Общество оценкам, будет составлять около 136,803 50,310 новых случаев и смертей из-за рака толстой кишки []. Рак толстой кишки вызывается поэтапного накопления мутаций в опухолевых супрессоров и онкогенных генов, что приводит к образованию полипов, которые в конечном итоге приводит к аденокарциномой []. Существует все больше доказательств того, что большинство видов рака, включая рак толстой кишки имеют иерархию клеток раковых стволовых клеток (ЦОК), образующие ядро и поддержания роста опухоли []. ЦОК ЦОК, в том числе толстой кишки имитировать функциональность нормальные взрослые стволовые клетки, сохраняя их ООН-дифференцированный государства во время разделения не-симметрично []. Они также устойчивы к обычной терапии, что приводит к рецидиву рака у большинства больных [,]. Агенты, мишенью ЦОК может быть более эффективным и помощь в предотвращении рецидивов.

Географические различия в заболеваемости раком толстой кишки и временных изменений риска среди иммигрантов предполагают, что диета и образ жизни сильно влияют на возникновение рака толстой кишки. Предоставление исследований по-прежнему накапливает о роли конкретных биологически активных элементов на риск колоректального рака, современные исследования показывают, что высокое потребление определенных диет, в том числе с высоким содержанием жира или красного мяса и низкое употребление диеты, богатой фруктами и овощами, связана с более высоким риском рака толстой кишки. Однако, в отличие от большинства видов рака, рак толстой кишки имеет длительный латентный период до его обнаружения (например, аберрантных крипт) []. Появляется все больше доказательств профилактических/защитная роль пищевых биологически активных соединений, таких как антоцианы из плодов, овощей и трав против различных видов рака, включая рак толстой кишки [,]. Индивидуальные антоцианы, питание-производных антоцианов экстрактов и потребления антоцианов-продукты, богатые проявляют антираковые свойства в как в пробирке и в естественных условиях исследования [,,]. Мы уже раньше показали, что антоцианы из картофеля экстракты подавлял пролиферацию клеток и индуцированного апоптоза в начале (НСТ-116) и расширенный (НТ-29) толстая кишка человека рак клеточных линий []. Однако, существует нехватка данных о противораковые свойства антоцианинов против ЦОК ЦОК, в том числе толстой кишки.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) прогнозирует, что там будет 70% увеличение заболеваемости раком в развивающихся странах []. Более 60% мирового новые случаи рака встречаются в Африке, Азии, Центральной и Южной Америке: 70 процентов в мире смертность от онкологических заболеваний также происходит в этих регионах []. Хотя эти страны имеют ограниченный доступ к новейших фармацевтических препаратов, люди в этих странах имеют доступ к продуктам, которые содержат химиопрофилактические биологически активных соединений, таких как антоцианы, а такие же, потребление этих продуктов может быть рекомендовано для борьбы/профилактики рака. В США и других развитых странах, существует повышенная осведомленность общественности о дополнительных и альтернативных лечебных подходов для профилактики хронических заболеваний, в том числе различных видов рака. Хотя исследования на целевые Фармакологические подходы растет риск разных видов рака, кажется, не стихают. Национальные расходы для лечения рака в США в 2010 г. составили почти $125 млрд и может достигнуть в 2020 году 156 млрд $[]. Следовательно, о правильном питании для профилактики рака, в том числе выявление новых или развития существующих пищевых биологически активного соединения-продукты, богатые требуются.

Родного Индийского дерева, Евгения jambolana (общее название: сливы java) встречается повсеместно в Азии, субконтинента и других тропических регионов мира []. В США, Евгения jambolana находится во Флориде и на Гавайях (АССР природных ресурсов, природоохранной службы завода баз данных). Это недозагружены тропическое вечнозеленое дерево дает маленькие фиолетовые яйцевидные мясистые плоды с вяжущим вкусом. Этот фрукт ценится за свои разнообразные химические компоненты, а также лекарственные и лечебные свойства [,]. В традиционной индийской медицине мякоть и экстракт семян имеют долгую историю использования в медицинских целях, и они были тщательно изучены для их антидиабетическими свойствами [,]. Предыдущие исследования определили основные антоцианы в Java сливы мякотью/кожи как diglucosides из дельфинидина, petunidin и мальвидин [,,]. Эти антоцианины, которые придают созревшие плоды ее ярко-фиолетовый цвет. Ява сливы, экстракт плодов (JPE), как было показано, проявляют антипролиферативные и про-апоптотические эффекты в эстроген зависимые/ароматазы положительные, и эстроген независимые раковые клетки молочной железы [,]. Однако, существует недостаток литературы по анти-рак толстой кишки свойств антоцианов богатых сливы java, особенно учитывая убедительные доказательства противораковых эффектов биологически активных антоцианов []. Кроме того, доказательств влияния антоцианов продукты, богатые против ЦОК толстой кишки остается неуловимым. Таким образом, нынешнее исследование было проведено в 1) характеризующие профиль антоцианов из JPE, и 2) определить противораковые свойства JPE на НСТ-116 и ЦОК кишки.

2. Результаты и обсуждение

2.1. Оценка профиля Биоактивные соединения в JPE

Лия Ли, и соавт. [] ранее сообщали антоцианов профиль ОСЗ. Они также сообщили, что концентрация и типов антоцианов в JPE отличается от региона ягоды. Пять типов антоцианов--дельфинидина-diglucoside, цианидин-diglucoside, petunidin-diglucoside, пеонидин-diglucoside, и мальвидин-diglucoside были выявлены в их работе с помощью hplc и LC-MS. в нашем исследовании мы также обнаружили пять сообщили, антоцианы, используя ВЭЖХ-МС (рис. 1 и табл. 1). На основании масс-спектральных данных, трех основных антоцианов пики были идентифицированы как дельфинидина-3, 5-diglucoside (1), цианидин-3, 5-diglucoside (2), и petunidin-3, 5-diglucoside []. Остальные шесть второстепенных компонентов антоцианов аналогичным образом были охарактеризованы как diglucosides из пеонидин (4), и мальвидин (5), и monoglucosides из дельфинидина (6), цианидин (7), petunidin (8) и мальвидин (9). Таким образом, можно предположить, что состав JPE могут быть схожими во всех точках, при этом его содержание может быть разным. Кроме антоцианов, другого класса фенольных соединений, выявленных в JPE содержит флавонолы (Кверцетин, Мирицетин, Кемпферол, Лютеолин, Изорамнетина), флаваноны (Нарингенин) и stilbenoid (Ресвератрол). Все эти соединения, как было показано, проявляют антираковые свойства [,].

Рис. 1
Высокоэффективная Жидкостная Хроматография (ВЭЖХ) хроматограммы Ява экстракты плодов сливы (JPE) антоцианы.
Таблица 1
Антоцианы, присутствующие в JPE и их м/з валес от ср. числа соответствуют пики выявленных в хроматограф из рис. 1.

2.2. JPE подавляется Пролиферация в НСТ-116 клеток

Под сложностью каждого рака лежит критических событий, в том числе разрегулированной пролиферации и угнетение апоптоза, что обеспечивает платформу, необходимую для поддержки дальнейшей опухолевой прогрессии. Клеточная пролиферация-это по сути увеличение числа клеток в результате клеточного роста и деления клеток []. В нашем исследовании мы оценивали анти-пролиферативных эффектов JPE помощью МТТ. Была зависимости от дозы подавление пролиферации клеток в НСТ-116 клеток на JPE. При 30 мкг/мл и 40 мкг/мл (Рис. 2а), там было подавление пролиферации (п < 0.05) более чем на 60% по сравнению с контролем. Распространение также оценивали путем подсчета клеток с помощью автоматического счетчика клеток (Nexcelom) путем обработки клеток с JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл, чтобы подтвердить наши наблюдения с помощью МТТ-теста. Обе концентрации вылилась в более чем 50% снижение жизнеспособных клеток номером (р < 0.05, Рис. 2Б). Подавление распространения JPE в НСТ-116 можно отнести наличие выявленных соединений--антоцианы, флавонолы и stilbenoids, которые были показаны ранее для подавления пролиферации раковых клеток толстой кишки в отдельности и в сочетании, в ин витроин виво, так и в клинических исследованиях [,,]. Предыдущие исследования с антоцианов богатых экстракты черноплодной рябины показали, что подавление пролиферации в НТ-29 толстой кишки раковые клетки происходит через арест клеточного цикла []. Таким образом, дальнейшее механистические исследования необходимы для изучения молекулярных механизмов анти-пролиферативного действия JPE против клеток рака толстой кишки, в том числе его влияние на пролиферативную путей и клеточного цикла.

Рис. 2
Ява экстракты плодов сливы (JPE) подавлял пролиферацию в НСТ-116 клеток. НСТ-116 клеток обрабатывали JPE (30 или 40 мкг/мл) в течение 24 часов, МТТ-теста (А) и жизнеспособных клеток (Б) проводят, как описано в методах. Значения в означает ± ...

2.3. JPE Индуцированного апоптоза в НСТ-116 клеток и ЦОК Колон

Отличительной чертой рака является способность раковых клеток к апоптозу избежать. Апоптоз можно рассматривать как серьезное препятствие для развития рака; избегая, таким образом, апоптоз является неотъемлемой частью развития опухоли и резистентность к терапии []. В нашем исследовании мы оценивали ли экстракт JPE, могут индуцировать апоптоз в обоих НСТ-116 клеток рака кишечника и толстой кишки ЦОК. Индукция апоптоза была испытываемых ТУНЕЛЬ анализа, где фрагментированная ДНК, характерной для апоптоза клеток, используется для идентификации апоптотических клеток. Среднее число флуоресцирующих клеток, указывают на более высокий уровень апоптоза (рис. 3С). JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл индуцировали апоптоз (р < 0,05) в НСТ-116 клеток по сравнению с контролем (рис. 3А,В). Далее, апоптоз также было подтверждено с помощью Каспазы 3/7 Гло анализа. Этот анализ измеряет активность каспаз 3 и 7, которые отвечают за фрагментацию ДНК. JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл повышен (р < 0.05) каспазы 3 и 7 зависимого апоптоза в НСТ-116 клеток (рис. 3Б) по сравнению с контролем. Сведения из туннеля и Каспазы 3/7 Гло анализа подтверждает, что JPE индуцирует апоптоз в клеточной линии рака толстой кишки НСТ-116. Про-апоптозного эффекта JPE можно отнести митохондрий-опосредованного апоптоза, так как высвобождение митохондриальных белков результаты цитохром С В пошаговый активации каспаз в конечном счете, приводит к фрагментации ДНК. Действительно, антоцианов, обогащенный экстрактами ягод черники было показано, что активация каспазы-3 в клеточной линии рака толстой кишки НТ-29 [].

Рис. 3
Сливы java фруктовые экстракты (JPE) индуцированный апоптоз НСТ-116 клеток; (в) процентов апоптоз НСТ-116 клеток (п = 400) измеряемый ТУНЕЛЬ анализа. (Б) апоптоза были также проанализированы с помощью каспазы 3/7 гло анализа. Значения в означает ± ГП. Значит, что отличаются ...

Как ЦОК толстой кишки обычно резистентной к стандартной лечения, мы оценивали, если JPE, могут индуцировать апоптоз в ЦОК толстой кишки с помощью Каспазы 3/7 Гло анализа. JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл индуцировали апоптоз даже в Цонах толстой кишки (р < 0.05) более чем на 75% и 165% соответственно по сравнению с контролем (Рис. 4). Впервые показано, что богатые антоциан JPE экстракт индуцирует апоптоз в раковых клетках толстой кишки человека НСТ-116 и ЦОК толстой кишки в зависимости от дозы. Наши текущие результаты показывают, что продукты, богатые антоцианы можно использовать для целевой ЦОК через подъемный апоптоза. Кроме того, недавно куркумин—основной полифенольные соединения содержатся в индийской специи куркумы, было показано, синергически действуют с химиопрепарат—схемы folfox в ликвидации колон ЦОК []. Таким образом, необходимы дальнейшие исследования для оценки противораковых свойств JPE монотерапии или в комбинации с химиотерапевтическими препаратами. Комбинированный подход позволяет снизить дозировку, таким образом, минимизации/исключения побочных эффектов.

Рис. 4
Ява экстракты плодов сливы (JPE) вызывают апоптоз в раковых стволовых клеток толстой кишки (ЦОК толстой кишки). Клетки обрабатывали JPE (30 или 40 мкг/мл) в течение 24 часов и каспазы 3/7 гло анализа была выполнена. Значения в означает ± ГП. Значит, что отличаются ...

2.4. JPE подавляется образование колоний в ЦОК Колон

Колон ЦОК обладают способностью инициировать и стимулировать экономический рост опухолей из-за их самообновления потенциала []. Для оценки способности JPE, чтобы цель эта возможность, мы использовали колонии формирования анализа (Рис. 5). Один клеточных суспензий ЦОК Толстой относился с JPE выращивали в культуральных планшетах с полной питательной среды и число колоний измеряли, как описано в методах. Колон ЦОК при обработке JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл соответственно привело к дозо-зависимым подавлением в колонии формирования (Рис. 5А). Рис. 5B также показывает, представителя изображений собранных из колонии образующие анализа и демонстрирует снижение численности колонии, связанные с JPE лечения по сравнению с контролем. Это показывает, что JPE влияет ЦОК самообновления способность толстой кишки и, таким образом, демонстрирует противораковые деятельности за пределами подавляя пролиферацию и индуцируя апоптоз.

Рис. 5
Эффект java экстракты плодов сливы (JPE) на stemness ЦОК толстой кишки. (А) клетки обрабатывали JPE (30 или 40 мкг/мл) в течение 24 часов и колонии формирование анализа проводили, как описано в методах. (Б) представитель снимков, сделанных из колонии ...

3. Материалы и методы

3.1. Экстракции и очистки Антоцианов из сливы java

На антоциан-богатый кожа фруктов и целлюлозы тщательно удаляют из цельных фруктов и экстрагируют подкисленным метанолом (0.1% Нсl). Этот экстракт концентрируют в вакууме (40 °C) в роторном испарителе для полного удаления растворителя. Затем концентрированный экстракт растворяют в подкисленной воде и секционированные этилацетатом для удаления фенольные соединения, флавоноиды и/или каротиноидов избирателей. Водный экстракт снова была сконцентрирована в вакууме (40 ± 1 °С) Для получения концентрата антоцианов. Для дальнейшей очистки антоцианов богатых концентрата адсорбируются активированным XAD-16 колонки на Амберлите смолы и элюируют с 3 томах кровать подкисленной водой (0.1% Нсl) для удаления Сахаров, кислот и/или других нежелательных растворимых в воде соединений. Антоцианы, адсорбированных на смоле были затем элюируют с подкисленным метанолом. Затем метаноле экстракт был сконцентрирован в rotavapor при температуре 40 °C под вакуумом. Полученный фиолетовый концентрат растворяют в дистиллированной деионизированной воде, содержащей 0.1% раствор соляной кислоты и лиофилизовали, чтобы получить очищенный порошок антоцианов. Материал хранился при -40 °С до дальнейшего исследования.

3.2. Химических веществ

Фетальной бычьей сыворотки (ФБС) был приобретен у HyClone (Питтсбург, Пенсильвания, США). Все другие химические вещества и реагенты были приобретены от Sigma (Сент-Луис, Миссури, США).

3.3. Высокая производительность жидкостной хроматографии масс-Спектрометрии (ВЭЖХ-МС) Анализ

JPE растворяли в метаноле до достижения концентрации 1 мг/мл. Профиль антоцианов из порошка концентрата оценивали в водах Альянса ВЭЖХ (Питтсбург, Пенсильвания, США), оснащенным вод четвертичных e2695 насос и 2998 детектор фотодиод массива. Антоцианов образца (20 мкл объемом впрыска; 1,0 мг/мл концентрации) анализировали на Phenomenex (torrance, Калифорния, США) РП-18 колонке (5 мкм, 4.6 × 250 мм), используя градиент от растворителя (вода, 0,1% трифторуксусной кислоты (tfa)) в растворитель B (вода:Серик аммиачной селитры (можно):тфу--53:46:1 В/объем/объем) при скорости потока 0,6 мл/мин. Градиент: вначале на 20% B, затем увеличилась до 40% за 26 мин, а затем до 80% в 4 мин и удерживается в течение дополнительных 10 минут. Антоцианы отслеживались в 520 нм.

Полученный элюент колонна была вселена на Micromass Q-не ТОФ микро-МС, оснащенных источник электроспрей (ESI) и проанализированы ее составляющие с помощью ЭСИ-МС/МС-спектрометр. Данные были получены в режиме положительных ионов, сканирование от 50-1200 со скоростью 0.9 сканирований в секунду с 0,1 секунды задержки решения. Калибровка была выполнена до анализа образца с помощью инфузии раствора формиата натрия, с массовой точность в пределах 5 промилле. Капиллярное напряжение было проведено в 2200 в, температура источника при 130 °C, и эффективной десольватации температуры в 300 °С при эффективной десольватации азот скорость потока газа 400 л/час. Квадруполь была проведена при энергии столкновений 7 в. пика тождества были получены путем сопоставления их молекулярной массы [м]+ и МС/МС фрагментации ионов, как показано в В таблице 1 и на рисунке 1 и в сравнении с данными литературы []. ЭСИ-МС успешно применялся ранее для характеристики биологически активных azadirachtins в нима [] и антрахинонов в ревматизм emodi [].

3.4. Клеточные Линии

Клеточных линий рака толстой кишки НСТ-116-получили щедрый подарок от Берта Vogelstein (школа медицины университета Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, США). Клетки поддерживали при 37 °C в увлажненной атмосфере с 5% со2 и вырос в Маккой Ф-12 добавлением 10% ФБС, 2.2 Г/Л бикарбоната натрия, 0,2 г/л бычьего сывороточного альбумина и 10 мл/Л стрептомицина-пенициллин перемешайте, как описано ранее [].

Раковые стволовые клетки толстой кишки (ЦОК толстой кишки), положительный результат на рак стволовых клеток маркеры для CD 133, диск 44 и ALDH1b1, были получены из Celprogen (Сан-Педро, Калифорния, США). Для поддержания клеток в недифференцированном состоянии, колон ЦОК техническое обслуживание средств массовой информации и специальным покрытием колбы культуре клеток, полученных от Celprogen были использованы. Клетки поддерживали в инкубации при 37 °С и 5% со2 , как описано ранее []. Культуры клеток примерно 80% слияния были использованы для всех в пробирке экспериментальные процедуры.

3.5. Жизнеспособность Клеток

 

3.5.1. МТТ-теста

На жизнеспособность клеток оценивали, используя анализ на основе расщепления желтый краситель МТТ (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-Ил) 2, 5-дифенил бромистого тетразолием) до пурпурного формазана кристаллов на активность дегидрогеназы в митохондриях. Кратко, 20,000 НСТ-116 клеток высевали в 96-луночный планшет и через 24 часа клетки обрабатывали JPE на 30 и 40 мкг/мл. Через 24 часа клетки были промыты СМИ, а затем они получили МТТ разводят в СМИ в течение 4 часов согласно протоколу производителя ("Рош диагностикс", Индианаполис, Индиана, США). СДС/использовался раствор NaOH до растворения фиолетовых кристаллов формазана, и измеряли оптическую плотность раствора при 570 и 690 нм. Эксперимент проводили в трех экземплярах, и данные выражали как среднее ± с. е.

 

3.5.2. Подсчет Клеток

Кратко, 100,000 НСТ-116 клеток высевают в 12-луночный планшет в течение 24 часов. К ним относились с JPE по 30 мкг/мл и 40 мкг/мл. После 24 часов, 20 мкл суспензии помещали в специализированных слайды, полученные из Nexcelom биологических наук (Лоуренс, штат Массачусетс, США) и затем вставляются в Nexcelom автоматического счетчика клеток. Эксперимент проводился в трех экземплярах, и данные выражали как среднее значение ± с. е.

3.6. Апоптоз

 

3.6.1. Гло Каспазы 3/7 Анализа

Кратко, 100000 клеток (НСТ-116 и толстой кишки ЦОК) высевали в 12-луночный планшет и инкубировали в течение 24 часов. Они угощали JPE на 30 и 40 мкг/мл, через 24 часа клетки были trypsinized и около 20 000 клеток от каждого лечения инкубировали с 100 мкл Каспазы 3/7 Гло реагент (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) в течение 30 мин в 96 луночный планшет. Свечения каждого образца измеряли с использованием Биотек микропластинчатых ридер (Winooski, Вермонт, США). Эксперимент проводили в трех экземплярах и сведения выражаются в означает ± с. е.

 

3.6.2. ТУНЕЛЬ анализа

Апоптоз был также оценен терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза трансферазы-опосредованной dUTP ник конце маркировки (ТУНЕЛЬ) с помощью анализа на месте комплект обнаружения гибели клеток от "Рош диагностикс". Эксперименты проводили в соответствии с рекомендованными процедурами завода-изготовителя. Кратко, JPE лечить НСТ-116 клеток, выращенных на стекле стекла фиксировали с помощью 4% параформальдегида в pbs и были permeabilized с 0.1% Тритон х-100 в 0,1% цитрата натрия в pbs. Они тогда были по локоть в ТУНЕЛЬ реакционной смеси и, наконец, исследовали с помощью люминесцентного микроскопа. Не менее 400 клеток в лечении были подсчитаны и результаты выражены как процент апоптоза (% соотношение апоптотических клеток/общего числа клеток). Эксперимент проводился в двух экземплярах и сведения выражаются в означает ± с. е.

3.7. Формирование Колонии Анализа

Способность JPE переделать stemness кишки ЦОК оценивалась через колонию формирование анализа [] путем подсчета количества колоний, которые могут образовываться после лечения. Кратко, 150,000 ЦОК кишечника высевали на лунку в 6-луночный планшет и инкубировали 24 ч в полной питательной среды. Через 24 часа роста носителя удаляли и клетки обрабатывали JPE скоростью 30 мкг/мл и 40 мкг/мл в течение 24 часов. Клетки были собраны trypsinization. Сто обработанных клеток высевали в каждую лунку нового 6-луночный планшет и инкубировали в течение 10 суток в полной питательной среды. В конце 10 дней, СМИ удаляли и клетки фиксировали с помощью фиксажа (3.7% параформальдегида в 70% этиловом спирте) в течение 10 минут. Клетки окрашивали 0.05% Coomassie Blue на 20 мин, а затем промывают в pbs. Локоть колонии подсчитывали под микроскопом рассекает, как описано ранее [].

3.8. Статистический Анализ

Данные были проанализированы с помощью однофакторного ДИСПЕРСИОННОГО анализа, используя Тьюки наименьших квадратов разницы (ЛСД) с программным обеспечением IBM SPSS и v22.0 (Армонк, Нью-Йорк, США).

4. Выводы

Биологически активных соединений, таких как антоцианы показали мощные противораковые эффекты в различных моделях [,]. Исследования также показали, что антоцианы, избирательно подавляют рост раковых клеток при этом относительно мало или никакого влияния на рост нормальных клеток []. Обычные варианты лечения рака обычно не конкретно целевой ЦОК ведущих к рецидиву в большинстве случаев. В нашем исследовании антоцианов богатых JPE наглядно продемонстрировали противораковые свойства не только в отношении ранней стадии НСТ-116 раковые клетки толстой кишки человека, но также индуцирует апоптоз и ингибирует самообновления способности в ЦОК кишки. Биодоступность антоцианов является низким и, следовательно, попадают в кишечник в больших концентрациях, и было высказано предположение, что концентрация в мкг/мл диапазон доз в толстой кишке возможны []. Количество в естественных условиях исследования демонстрируют базовых механистические ссылки на противораковые свойства химиопрофилактические фитохимические производные от диетического питания является относительно низким и, следовательно, возникает необходимость большего числа исследований о том, как пищевые биологически активных соединений могут комплексно помочь в предотвращении рака толстой кишки. Многообещающие результаты нашего экспериментального исследования на JPE анти-рак эффекты заслуживают дальнейшего исследования, чтобы оценить влияние JPE на ЦОК в естественных условиях с использованием животной модели рака толстой кишки.

Благодарности

Джейрам К. П. Vanamala был ПИ Национального исследовательского интереса комплексной Грант 2009-55200-05197 от USDA-НИФА, который поддерживает работу представлены в этой рукописи.

Автор Взносам

Венката Charepalli и Vadde Рамакришны проведены все эксперименты с клеточной культурой. Суреш Валия проводят экстракцию и количественное определение сливы java. Венката Charepalli и Шридхар Радхакришнан подготовил рукопись. Lavanya Reddivari и Джейрам К. П. Vanamala отредактировал и помог в формировании рукописи. Lavanya Reddivari и Джейрам К. П. Vanamala задуманного исследования. Венката Charepalli, Lavanya Reddivari, Шридхар Радхакришнан и Джейрам К. П. Vanamala участвовал в его проектировании. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Конфликта интересов

Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов. Авторы пополнение принимала никакого участия в разработке исследования; сбор, анализ и интерпретацию данных; написание рукописи, и в решение публиковать результаты.

Список литературы

1. Зигель р., Ма Ю., Цзоу Ж., Джемал А. Рак статистика, 2014. Калифорния рака Ж. Клин.2014;64:9-29. дой: 10.3322/ДВК.21208. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
2. Марковиц С. Д., Бертаньолли М. М. молекулярно-происхождение рака: молекулярные основы рака прямой кишки. Н. Англ. Ж. Мед. 2009;361:2449-2460. дой: 10.1056/NEJMra0804588.[ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
3. Рея т., С. Моррисон Дж., Кларк М. Ф., Вайсман И. л. стволовых клеток, рака и раковых стволовых клеток. Природа. 2001;414:105-111. дои: 10.1038/35102167. [В Pubmed][Перекрестная Ссылка]
4. Тодаро М., Francipane М. г., Medema Ю. П., Stassi г. рак толстой кишки стволовых клеток: обещание таргетной терапии. Гастроэнтерология. 2010;138:2151-2162. дой: 10.1053/Дж.гастро.2009.12.063. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
5. Ой П. С., Пател в. Б., Сандерс М. А., Канвар С. С., Ю. Ю., Nautiyal Джей Патель Б. Б. Маджумдар А. П. Schlafenбыл-3 снижает раковых стволовых клеток маркер выражения и аутокринной/juxtacrine сигнализации в схемы folfox-упорный рак толстой кишки клетки. АМ. Ж. Физиол. Наук. Gastrointest. Physiol В Печени. 2011;301:347-355. в doi: 10.1152/ajpgi.00403.2010.[РМС бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
6. Чжан М., Розен Ю. М. стволовые клетки в этиологии и лечении рака. Отв. Опин. Жене. Дев.2006;16:60-64. дой: 10.1016/J.где.2005.12.008. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
7. Американского общества рака Колоректальный рак факты и цифры 2014-2016. [(стр. 2; по состоянию на 25 января 2016 года)]. Доступен онлайн:http://www.cancer.org/Research/CancerFactsStatistics/colorectal-cancer-facts-and-figures-2014-2016.
8. Ауне Д., р. Лау, Чан Д. С., Виейра р., Гринвуд округ Колумбия, Кампман е., Норат т. Нелинейное снижение риска колоректального рака путем потребления фруктов и овощей на основе Мета-анализа проспективных исследований. Гастроэнтерология. 2011;141:106-118. дой: 10.1053/Дж.гастро.2011.04.013. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
9. Boffetta П., Фернанду Коуту е., Вихман Я., Феррари П., Trichopoulos Д., Буэно-де-Мескита Х. Б., Ван Duijnhoven Ф. Я., Бюхнер л. Ф., ключ т., Боинг Х. потребления фруктов и овощей и в целом риск рака в европейского проспективного исследования связи рака с питанием (Epic) Ю. Национальное. Рак Инст. 2010;102:529-537. в doi: 10.1093/jnci/djq072. [В Pubmed][Перекрестная Ссылка]
10. Мартин С., Фавот л., Мац р., Lugnier С., Andriantsitohaina р. Дельфинидина ингибирует эндотелиальную пролиферацию клеток и клеточный цикл прогрессии через переходную активацию эрк-1/-2. Биохим. Pharmacol. 2003;65:669-675. дои: 10.1016/S0006-2952(02)01568-Х.[в pubmed] [перекрестная ссылка]
11. Ван л. с., Стоунер г. Д. Антоцианы и их роль в профилактике рака. Рак Латыш. 2008;269:281-290. дой: 10.1016/J.canlet.2008.05.020. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
12. Thomasset С., Ягода Д. П., Цай Х., Уэст К., Marczylo т. г., Марсден Д., Браун К., Деннисон А., Garcea г., Миллер А. экспериментальное исследование устного антоцианы для химиопрофилактики колоректального рака. Рак Пред. Рез. 2009;2:625-633. в doi: 10.1158/1940-6207.CAPR-08-0201. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
13. Madiwale г. П., Reddivari л., М. камень, Холм Д. г., Vanamala Ж. комбинированного воздействия хранения и обработки биологически активных соединений и про-апоптотические свойства цвета мякотью картофеля в толстой кишке раковых клеток. Дж. Пищевой Химии. 2012;60:11088-11096. в doi: 10.1021/jf303528p. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
14. Стюарт Б., С. Дикий мир раком отчета за 2014 год. Международное Агентство по изучению рака Всемирной организации здравоохранения; Лион, Франция: 2014.
15. Сигел р. л., Миллер К. Д., Рак А. Джемала статистике, 2015. Калифорния рака Ж. Клин.2015;65:5-29. дой: 10.3322/ДВК.21254. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
16. Торре л. А., Брей Ф., Сигел р. л., Ferlay J. и Lortet-Tieulent Джей Джемаль А. мировой статистике рак, 2012. Калифорния рака Ж. Клин. 2015;65:87-108. дой: 10.3322/ДВК.21262.[В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
17. Veigas вам Ю. М., М. С. Нараяна, Лаксман П. М., Neelwarne Б. Химическая природа, стабильности и bioefficacies антоцианов из кожицы фруктов из сизигиум cumini скилзы платить.Пищевой Химии. 2007;105:619-627. дой: 10.1016/J.foodchem.2007.04.022. [Перекрестная Ссылка]
18. Benherlal П. С., Arumughan С. химический состав и в vitro антиоксидантных исследований по сизигиум cumini фруктов. Дж. Н. Еда Сайт Agric. 2007;87:2560-2569. дои: 10.1002/jsfa.2957.[В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
19. Sagrawat Х., Манн А., харя М. Фармакологический потенциал Евгения jambolana: обзор.Pharmacogn Маг. 2006;2:96-105.
20. Helmstädter А. Сизигиум cumini (L.) в скилзы платить (Myrtaceae) против диабета--125 лет исследования. Умереть Pharmazie. 2008;63:91-101. [В pubmed]
21. Ayyanar М., Субаш-бабу П. Сизигиум cumini (L.) в скилзы платить: обзор его фитохимических компонентов и традиционного использования. Азиатский Пак. Ж. Троп. "Биомед". 2012;2:240-246. дои: 10.1016/S2221-1691(12)60050-1. [ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
22. Де Брито е. С., М. С. П. де Араужо Алвес р. е., Carkeet С., Clevidence Б. А., Новотны и. А. Антоцианы, присутствующие в некоторые тропические фрукты: вишня-Ацерола, jambolão, jussara, и гуажиру. Дж. Пищевой Химии. 2007;55:9389-9394. дои: 10.1021/jf0715020. [В Pubmed][Перекрестная Ссылка]
23. Ли л., Адамс С. л., с. Чен, Киллиан С., Ахмет А., на сирама Н. П. Евгения jambolana лам. Ягодный экстракт ингибирует рост и индуцирует апоптоз рака молочной железы человека, но не являющихся опухолеобразующим клеток молочной железы. Дж. Пищевой Химии. 2009;57:826-831. дои: 10.1021/jf803407q. [ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
24. Назиф Н. м. антоциановые компоненты и цитотоксической активности Сизигиум cumini (L.) из плодов, растущих в Египте. Нац. Прод. ТСМ. 2007;13:135-139.
25. Ли л., Адамс С. л., с. Чен, Киллиан С., Ахмет А., на сирама Н. П. Евгения jambolana лам. Ягодный экстракт ингибирует рост и индуцирует апоптоз рака молочной железы человека, но не являющихся опухолеобразующим клеток молочной железы. Дж. Пищевой Химии. 2009;57:826-831. дои: 10.1021/jf803407q. [ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
26. Ван л. с., Арнольда М., Хуан Ю. в., Сардо С., Э. Сеген, Э. Мартин, Хуан т. Х., Ридл К., Шварц С., Френкель В., и соавт. Модуляция генетических и эпигенетических биомаркеров колоректального рака в организме человека на черной малины: I этап экспериментального исследования. Клин. Рак Рез. 2011;17:598-610. дой: 10.1158/1078-0432.ЦКР-10-1260.[ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
27. Галац г., О'Брайен П. Дж потенциальная токсичность флавоноидов и других биологически активных фенольных: значение для их химиопрофилактические и противоопухолевые свойства.Бесплатные Радича. Биол. Мед. 2004;37:287-303. дой: 10.1016/J.freeradbiomed.2004.04.034.[В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
28. Vanamala Дж., Радхакришнан С., Reddivari л., Бхат в. Б., Птицына А. Ресвератрол подавляет пролиферацию клеток рака толстой кишки человека и индуцирует апоптоз через пристреливать пентозофосфатного и талин-фак сигнальных путей-это протеомный подход. Протеом ТСМ. 2011 в doi: 10.1186/1477-5956-9-49. [ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
29. Hanahan Д., Вайнберг р. А. признаки рака: следующее поколение. Клетки. 2011;144:646-674. дой: 10.1016/J.клетки.2011.02.013. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
30. Vanamala Я., Reddivari л., Радхакришнан С., Тарвер С. Ресвератрол подавляет ИФР-1 индуцированной пролиферации клеток рака толстой кишки человека и повышает апоптоз по борьбе с ИФР-1Р/wnt и активации сигнальных путей р53. БМК Рак. 2010 в doi: 10.1186/1471-2407-10-238. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
31. Юн Ю. М., Афаг Ф., Хан Н., Мухтаров Х. Дельфинидина, также антоцианидин в пигментированных фруктов и овощей, индуцирует апоптоз и арест клеточного цикла в человеческой рака толстой кишки HCT116 клеток. Мол. Carcinog. 2009;48:260-270. дои: 10.1002/МК.20477. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
32. Малик М., Чжао С., Schoene Н., Guisti М. М., Мойер М. П., Магнусон Б. А. Антоциан-богатый экстракт из черноплодной рябины meloncarpa е. индуцирует блок клеточного цикла в рак толстой кишки но нет нормальных кишечных клеток. Нутрь. Рак. 2003;46:186-196. в doi: 10.1207/S15327914NC4602_12. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
33. Шривастава А., Akoh С. С., Фишер Я., Krewer г. влияние антоцианов фракций из отборных сортов Грузии выращивают чернику на апоптоз и ферменты фазы II. Дж. Пищевой Химии.2007;55:3180-3185. дои: 10.1021/jf062915o. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
34. Ю. Ю., Канвар С. С., Б. Б. Патель, Nautiyal Я., Ефремова г. Ф., Маджумдар А. П. выведение толстой кишки раковые стволовые клетки, как сочетание куркумина и схемы folfox. Перев. Онкол.2009;2:321-328. дой: 10.1593/тло.09193. [ЧВК бесплатно статьи] [в pubmed] [перекрестная ссылка]
35. Тодаро М., Алеа М. П., Ди Стефано А. Б., Камарери П., л. Вермюлен, знакомства Ф., Tripodo К., Руссо А., Gulotta г., Medema Ю. П. рак толстой кишки стволовых клеток диктовать роста опухоли и противостоять гибель клеток, продукцию интерлейкина-4. Стволовых Клеток. 2007;1:389-402. дой: 10.1016/J.стебель.2007.08.001. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
36. Радхакришнан С., Reddivari л., Sclafani р., Дас У. Н., Ж. Vanamala Ресвератрол усиливает экстракт семян винограда индуцированной толстой кишки человека раковых клеток апоптоза.Передний. Biosci. 2011;3:1509-1523. дой: 10.2741/352. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
37. Мэсси р. А., Reddivari л., Vanamala Ж. дермальный слой сладкого сорго (сорго биколор) стебель, побочный продукт производства биотоплива и источника уникальный 3-deoxyanthocyanidins, имеет более антипролиферативных и проапоптотических активности, чем бузина в р53 вариантов рака толстой кишки HCT116 и стволовых клеток. Дж. Пищевой Химии. 2014;62:3150-3159.[В pubmed]
38. Апель А., герр И., Шварц Х., Rodemann Н. П., Майер А. заблокирован аутофагии сенсибилизирует упорной карциномы клеток к лучевой терапии. Рак Рез. 2008;68:1485-1494. в doi: 10.1158/0008-5472.Может-07-0562. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
39. Matés Ю. М., Сегура Ж. А., Алонсо Ф. Я., Маркес, Дж Противоопухолевый антиоксидант регулирующих функций фитохимические. Отв. Мед. Хим. 2011;18:2315-2338. дой: 10.2174/092986711795656036. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
40. Charepalli В., Reddivari Л., Радхакришнан С., Vadde Р., Агарвал Р., Vanamala К. П. Ж. Ж. Нутрь. Биохим. Объем. 26. Reddivari; 2015. Антоциан-содержащей фиолетовый мякотью картофель подавить толстой кишки опухолей по ликвидации раковых стволовых клеток толстой кишки; стр. 1641-1649. [В Pubmed] [Перекрестная Ссылка]
41. Чжао С., Джусти М. М., Малик М., Мойер М. П., Магнусон Б. А. эффекты коммерческого антоциан, обогащенный экстрактами на рак ободочной и толстой кишки nontumorigenic рост клеток. Дж. Пищевой Химии. 2004;52:6122-6128. в doi: 10.1021/jf049517a. [В Pubmed][Перекрестная Ссылка]
42. Scalbert А., Уильямсон г. поступление с пищей и биодоступности полифенолов. J. В Нутрь.2000;130:2073S–2085S. [В pubmed]
Яндекс.Метрика

Оставить комментарий

Комментарии: 0