Сб

18

июн

2016

КВЕРЦЕТИН, СУЛЬФОРАФАН И ПОЛИФЕНОЛ ЗЕЛЕНОГО ЧАЯ (EGCG) ДОПОЛНЯЮТ ДРУГ ДРУГА В ПОДАВЛЕНИИ РАКА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

рак поджеледочной железы лечение кверцетин судьфорафан полифенол зеленого чая EGCG

Панкреатическая протоковая аденокарцинома имеет худший прогноз среди всех злокачественных новообразований, и нынешние терапевтические возможности не направлены против раковых стволовых клеток (РСК), которые могут быть причиной крайней агрессивности этого вида рака. Как оказалось вещества из продуктов питания - сульфорафан и кверцетин, а также самый изученный кахетин EGCG зеленого чая оказывают влияние против РСК поджелудочной железы путем индукции miR-let7 и ингибирование К-ras.

ИССЛЕДОВАНИЕ (перевод автоматический без адаптации)
Авторы: Университетская клиника Гейдельберга и немецкого Центра исследований рака, Гейдельберг, Германия
Дата: октябрь 2014
Источникwww.ncbi.nlm.nih.gov

Введение

Панкреатическая протоковая аденокарцинома (КПК) является одним из наиболее агрессивных злокачественных новообразований, как правило, диагностируется в поздней стадии, с обширной местной инвазии, раннее системное распространение и отмечена устойчивость к химио - и лучевой терапии (). Часто дизрегуляции генов к-РАН, который экспрессируется в более чем 90% пациентов, страдающих от КПК (). Текущие варианты лечения для КПК обеспечивают 5-летнюю выживаемость только 5%. Раковые стволовые клетки (ЦОК) привлечены к ответственности за выраженные терапии сопротивление и раннее прогрессирование ПДА, потому что этот небольшой субпопуляции внутри опухолевых масс мысль, чтобы выжить обычные цитостатическую терапию из-за защиты и механизмы выживания (,). ЦОК, как считается, обладают самообновления потенциал и способность делиться несимметрично, в результате материнская клетка производит стволовые клетки и прогениторные клетки, которая претерпевает клональную экспансию и затем окончательно дифференцирует (). Потому что текущая терапия не целевой ЦОК, новые терапевтические возможности срочно.

Несколько эпидемиологических исследований рака и питания предоставлять новые терапевтические перспективы, потому что они показывают, что риск развития рака и риска возникновения рака прогрессирования коррелирует с определенными диетическими предпочтениями. Одно хорошо-конструированный большой популяционное случай-контроль исследование показало, что частое употребление в пищу крестоцветных овощей, три и более порций в неделю, например, брокколи, цветная капуста, капуста, редька, хрен, Кресс-салат, руккола, горчица, рапс и другие, имели около 50% снижению риска развития рака поджелудочной железы (). Другое проспективное эпидемиологическое исследование показало, что высокое потребление крестоцветных овощей, особенно брокколи и цветной капусты было связано с 50 % снижением относительного риска развития метастазов у больных раком предстательной железы (). Кроме того, популяционные исследования случай-контроль, проведенного в городах Шанхае, Китай, обнаружили, что обычный зеленый чай пить было связано с 32% снижением риска рака поджелудочной железы у женщин (). Хорошо изучили биологически активные вещества из брокколи, цветной капусты и зеленого чая привлекать изотиоцианат сульфорафан (), в семье полифенол катехины () и полифенолов кверцетин, который является одним из самых распространенных флавоноиды, содержащиеся во многих фруктах и овощах, таких как брокколи, яблоки, лук и ягоды ().

Наши последние экстракорпорального сведения и мыши эксперименты показывают, что сульфорафан устраняет поджелудочной Цонов путем ингибирования NF-кв-активности и самообновления, потенциал и тем самым сенсибилизирует клетки к индукции апоптоза (). После опубликования этих результатов многие пациенты обращались к нам, и мы рекомендуем сбалансированной растительной диеты, обогащенной в крестоцветных овощах. Мы не рекомендуем делать акцент на овощи семейства крестоцветных брокколи или добавки, потому что тем временем также другие растительные ингредиенты с Анти-ЦОК деятельности определены (). В частности, кверцетин и эпигаллокатехин-3-галлат (ЭГКГ) были описаны для целевой поджелудочной Цонов (,). Других биологически активных соединений с экспериментально доказано прямое или косвенное воздействие на wnt/β-катенин, ежик и Зазубрины самообновления пути включают куркуму специю компонент куркумин, соевые изофлавоны, ресвератрол, ликопин, пиперин и витамин D3 (). Там еще могут быть некоторые другие растительные вещества с аналогичной деятельностью. Таким образом, высокое потребление сбалансированной смеси растительных продуктов с доказанной активностью в отношении ЦОК может превосходить потребление добавок с изолированным веществ.

В последнее время индол 3,3'-дииндолилметан (овощах семейства крестоцветных), полифенолом, генистеин (сои) и аналог естественного фенола куркумин (куркума) была продемонстрирована для подавления роста поджелудочной железы и рака предстательной повышенной экспрессии микро-РНК (мир)-пусть-7 (). Мир-пусть-7 (из ‘смертельной’) является одним из первых идентифицированные микрорнк, из-за его роли в смертельно дифференциации С. elegans шов клеток (). Функция мир-пусть-7 в раке человека была обнаружена, и уровни экспрессии пусть-7 членов существенно ниже в людских раках и ЦОК. Основная функция пусть-7 является содействие терминальной дифференцировки в развитии опухоли и подавление (). Пусть-7 был продемонстрирован прямым регулятор к-РАН экспрессии в клетках человека (). В легких больного раком образцы, выражением к-рас-и Let-7 показал взаимных модели пусть-7 и высокое к-RAS в раковых клетках, но с высокой лпэ-7 и низким K-RAS в нормальных клетках (). Во многих видах рака, подавление мир-дайте-7 связана с плохим исходом для пациентов ().

В настоящем исследовании мы спросили, если зеленый чай-производные катехинов в целом может иметь анти-ЦОК деятельности, если в сочетании с кверцетин и сульфорафан может стать высоким, если регуляция мир-пусть-7 и подавление к-РАН не участвует. Мы показали, что эпикатехин-3-галлат (ecg) и катехин галлат (кг) являются мощным, как egcg в ингибировании колонии-формировании. Кроме того, сульфорафан, кверцетин и натуральный состав полного комплекта катехины зеленого чая (GTC с) дополняют друг друга в индукции апоптоза и ингибирование самообновления, потенциал, Миграция и экспрессию матриксных металлопротеиназ ММП-9 и ММП-2. Самое главное, что эти биоактивные вещества приводит к индукции мир-дайте-7 и ингибирование его Гена-мишени, к-РАН с сильные эффекты после комбинации.

Материалы и методы

Установленных клеточных линий и первичных клеток

Установленные человеческого КПК BxPc-3 клетки линии и Миа-PaCa2 и человека hTERT-HPNE увековечен панкреатического протока клетки СЛС-1097 были получены из американской коллекции типов культур (Манассас, штат Вирджиния, США). Первичного человека ПДА клеток PaCaDD-183 были изолированы от пациента КПК ткани, как описано (). Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки культивировали в среду dmem (ПАА, pasching, Австрия) с добавлением 10% тепла инактивированной ФТС (Сигма Дайзенхофен, Германия) и 25 ммоль/л HEPES (ПАА). Клетки проходят проверку всей культуры типичной морфологии. Для поддержания аутентичности клеточных линий, замороженные запасы были подготовлены от начальных запасов, и каждые три месяца новый замороженный запас был использован для экспериментов. Подлинность установленных клеточных линий была сертифицирована в апреле 2013 года. Микоплазма-отрицательный культуры обеспечивается ежемесячное тестирование.

Обработка клеток

Эпигаллокатехин галлат (egcg), эпикатехина галлат (ecg), катехин галлат (кг) (Сигма) разводят в воде до 50 мм маточного раствора. Экстракт зеленого чая (ОПУ), содержащий полифенолы 588 мг/600 мг, из которых 50% ЭГКГ (Доктор лож + ко. ГмбХ, Мюнхен, Германия) разбавляли в ДМСО на 300-мм маточного раствора. Кверцетин (Сигма) разводят в ДМСО в 200-мм маточного раствора и дл-сульфорафан (Сигма) разводят в etoh до 100 мм маточного раствора. Конечная концентрация растворителя в реакциях культуре клеток был 1:1000 и выше.

Жизнеспособность анализа

Жизнеспособность определяли с помощью 3-(4,5-диметилтиазол - 2-ил)-2,5-diphenyltetrazolium бромид (МТТ), как описано ранее ().

Измерение апоптоза

Клетки окрашивали флуоресцеин изотиоцианат (ДИТЦ)-конъюгированного Аннексина V (BD биотехнологии, Гейдельберг, Германия) и экстернализации фосфатидилсерина был определен методом проточной цитометрии (FACScan, BD биотехнологии). Фрагментация ДНК была обнаружена окрашивание фрагментированной ДНК пропидий йодид буфер по Николетти и др ().

Обнаружение активности ALDH1

В общей сложности 2,5 мкл Aldefluor субстрата (Aldagen, Дарем, США) был добавлен 1×106 клеток в 500 мкл рабочего буфера и инкубируют 60 мин при комнатной температуре. В качестве отрицательного контроля диэтиламино-бензальдегид (ДЕАБ) был добавлен к клеткам. Активность ALDH1 измеряли методом проточной цитометрии (FACScan, BD биотехнологии).

Колониеобразующие анализа

Семьдесят два часа после обработки клеток высевали в полной среде в 6-ну культура клеток плиты (ТПП) и колониеобразующие анализы проводили, как описано ранее ().

Сфероид анализа

Для формирования сфероидов, клетки культивировали в NeuroCult НС-базальный бессывороточной среде (человека) (StemCell технологий, Ванкувер, Канада) с добавлением 2 мкг/мл гепарина (StemCell технологий), 20 нг/мл hEGF (НИОКР систем, Висбаден-nordenstadt, Германия), 10 нг/мл hFGF-б (PeproTech, Гамбург, Германия) и NeuroCult НС-увеличение добавки (StemCell технологий). Клетки высевали при низкой плотности (2×102 до 1×103 клеток/мл) в 12-луночный низким сцеплением пластины (1 мл/хорошо). Пять дней спустя, формирования сфероида была видна и сфероидов угощали. Через сорок восемь часов после сфероидов лечения были диссоциированы при помощи энергичного пипетирования вверх и вниз, с последующей оценкой количества трипановым-синим негативных клеток, и пересевом, как описано выше (1-го поколения). На формирование сфероидов, клетки были обработаны повторно с природными веществами и количества жизнеспособных клеток определяли путем подсчета трипановым синим-отрицательные клетки (2-го поколения).

Вестерн-блот анализ

Белки были выделены, и вестерн-блот анализ проводили, как описано ранее (). Следующие антитела были использованы: кролик поликлональных AB против человека РАН (клеточных сигнальных технологии, Данверс, Массачусетс, США) - это антитело распознает эндогенные уровни общего к-РАН, Н-ран и N-RAS и может перекрестную реакцию с Р-И М рас-рас. Mab мыши против человеческого β-актина от Сигма.

Определение ММП-2, ММП-9 и к-РАН экспрессии мРНК

Тотальную РНК выделяли с помощью набора RNeasy мини (компания qiagen, hilden, Германия) согласно инструкции производителя. кднк была синтезирована с iScript синтез Kit™ кднк (Био-рад, Мюнхен, Германия). ПЦР проводили с использованием реагентов и LightCycler®-ПЦР машина (Рош диагностикс ГмбХ, г. Мангейм, Германия), как описано недавно (). Конкретный пример пары (РГБ биотехнологии, Эберсберг, Германия): β-актина 5'-TGACGGGGTCACCCACACTGTG CCCATCTA-3' (смысл), 5'-CTAGAAGCATTTGCGGTGGAC детальной-3' (антисмысловая); ММП-9: 5'-GACCTCAAGTGGCACC АССА-3' (смысл), 5'-GTGGTACTGCACCAGGGCAA-3' (антисмысловая); ММП-2 5'-AGTCTGAAGAGCGTGAAG-3' (чувство), 5'-CCAGGTAGGAGTGAGAATG-3' (антисмысловая), К-рас-5'-на TCCTTTTATTGAAACATCAGCA-3' (чувство), 5'-TCGGAT CTCCCTCACCAAT-3' (антисмысловая). Условия ПЦР были для ММП-2 и к-РАН: 95 ° С В течение 20 сек, затем 58°C в течение 30 сек; ММП-9: 95°C в течение 20 секунд, затем 60°С В течение 30 сек. Фолд изменения экспрессии генов-мишеней по отношению к β-актина были рассчитаны с использованием 2-ΔΔCt - метод.

Обнаружение микрорнк выражение

Микрорнк был извлечен с комплекс mirvana изоляции мирна комплект (прикладные Биосистемы/жизнь технологий, Дармштадт, Германия) согласно инструкции производителя. Общая РНК, содержащие мирнк был синтезирован в кднк с комплектом miScript II в РТ (заказать). Количественный анализ микрорнк проводили с использованием miScript SYBR-зеленый комплект ПЦР (Заказать) и LightCycler ПЦР (Тошиба). Транскриптов, полученных с U6 праймеры были использованы для нормализации. Последовательность понимании мир-давайте-7а был 5'-TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTTGG-3' (РГМ биотехнологии); Универсальная грунтовка антисмысловые и У6-контроль праймеры в miScript SYBR-зеленый комплект ПЦР. Условия ПЦР были 95°C в течение 15 сек, 60°C в течение 20 сек. Сложите меняет мир-давайте-7а экспрессии генов относительно линии U6 были рассчитаны с использованием 2-ΔΔCt - метод.

Transwell миграции анализ

Анализ инвазивный потенциал клеток мы использовали стандартную transwell анализа. Transwell фильтров поликарбонат 8 мкм Размер пор (Корнинг Инк., Лоуэлл, Массачусетс) были использованы. ССК используется в качестве химио-аттрактанта с МДСИ в Нижнем отсеке. Сульфорафан, кверцетин и катехин предварительно обработаны (18 ч) или необработанные клетки высевали в концентрации 105 клеток/см2 В 24-луночных планшетах. Клетки в бойден камеры инкубировали при 37°С и 5% со2. Через 24 ч Количество переселился клетки подсчитывали. Процент переселился клеток нормированы процент жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ теста по конечной точке эксперимента.

Статистический анализ

Количественные данные представлены как среднее ± SD. Группы сравнивали с помощью непараметрического теста Манна-Уитни. Мы точечного p-значения без поправки на множественные сравнения, поскольку этот проект носит ознакомительный характер. Контроль был по сравнению с одной группой лечения и сингл группы лечения по сравнению с двойной группах лечения. *P<0,05 и**р<0,01 считались статистически значимыми.

Результаты

Комбинация биологически активных веществ превосходит снижение самообновления потенциал по сравнению с отдельными агентами

Недавно сульфорафан, кверцетин и ЭГКГ (Рис. 1) были описаны целевые поджелудочной КБК характеристики (,,,). Мы спросили, если другие катехины зеленого чая могут иметь подобные действия и если комбинация биоактивных добавок могут повысить эффективность. Человеческий установленного КПК клеточные линии МВД-PaCa2 с высокой КБК характеристики и BxPc-3 с низким КБК характеристики служил в качестве модели клеточных линий (сравните таблицу I).

Рис. 1
Химические формулы сульфорафан, кверцетин и катехины зеленого чая и фотографий фруктов и овощей укрывательстве этих биологически активных веществ.
Таблица I
Характеристики установленного поджелудочной железы клеточных линий.

Для оценки влияния одного или в сочетании биоактивных добавок к самообновлению потенциал, Миа-PaCa2 клетки, принимавших сульфорафан, кверцетин, ЭГКГ, ЭКГ и кг отдельно или в комбинации. Семьдесят два часа спустя клетки высевали в клональной плотности, и после еще 2 недели на формирование колоний были проанализированы (Рис. 2А). Каждого отдельного вещества значительно снизилась колониеобразующих емкость и ЭКГ и кг имел сильный эффект, чем ЭГКГ. Формирование колонии был сокращен на комбинации кверцетина/сульфорафан и сульфорафан/ЭГКГ, в то время как комбинации кверцетина/ЭКГ, кверцетин/кг, СФ/ЭКГ и SF/кг не оказывало существенного влияния по сравнению с одной процедуры. Ведь для каждого из рассматриваемых катехины сильно сократили колониеобразующих мощности, мы оценивали общее зеленого чая катехины в их натуральный состав и использовать очищенный и не содержащий кофеина экстракт зеленого чая. Эти катехины зеленого чая (ОПУ) состоял из 588 мг полифенолов катехина/600 мг экстракта, из которых 50% были ЭГКГ (данные ВЭЖХ доступны от производителя: Доктор лож + ко. ГмбХ). Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки были обработаны сульфорафан, только кверцетина или GTC, или в сочетание. После этого Миа-PaCa2 клеток и BxPc-3 клетки высевали для формирования колонии. Две недели спустя, один процедур заметно уменьшается образование колонии, а сочетание лечение было более эффективным и почти полностью упразднены колонии-формирование (Рис. 2Б). Аналогично, измерение самообновления, потенциал лечения шаровидным растущих Миа-PaCa2 клетки показали значительно снижается количество сфероидальных растущих клеток через 48 ч после однократной обработки, который был сокращен комбинированное лечение (Рис. 3А). BxPc-3 клетки не были использованы для оценки формирования сфероида, потому что эта клеточная линия является менее агрессивным и не образует сфероиды (Таблица I). Если оценивать по сохранившимся Миа-PaCa2 клеток от первой обработки могут быть полностью устранены на второй этап лечения, мы повторно высевали одинаковое количество выживших клеток. После формирования сфероида, клетки снова лечение. Это привело к почти полной ликвидации шаровидным растущих клеток после одной процедуры и почти полной ликвидации путем комбинированного лечения (Рис. 3Б). Наблюдаемые эффекты на самообновление потенциал были подтверждены путем измерения активности ALDH1, который является еще одним показателем обновление. После лечения Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки, активность ALDH1 измерялась ALDEFLUOR субстрат опробования и анализа движений. ОПУ в покое уменьшается ALDH1 активность значительно, но комбинации были более выраженные эффекты (Рис. 3С). Эти данные позволяют предположить, что самообновление потенциал сильно угнетается лечение сульфорафан, кверцетин или GTC в одиночку, но комбинации ОПУ/сульфорафан, ГТЧ/кверцетин или сульфорафан/кверцетин превосходят. Интересно, что сочетание изотиоцианат с полифенолами (ОПУ или кверцетин) был сильнее, чем сочетание двух различных агентов полифенольных.

Рис. 2
Комбинации биологически активных агентов превосходят в снижении clonogenicity по сравнению с отдельными агентами. (А) Миа-PaCa2 клетки оставались необработанными или обрабатывали 10 мкм сульфорафан (СФ), 200 мм кверцетин (кв), 40 мкм эпигаллокатехин галлат ...
Рис. 3
Комбинации биологически активных агентов на уменьшение образования сфероида по сравнению с отдельными агентами. (А) Миа-PaCa2 клетки высевали в клональной плотности низкого сцепления пластины для формирования сфероида. Через три дня клетки обрабатывали, как описано ...

Комбинация биологически активных веществ превосходят в снижении жизнеспособности, миграционного потенциала, наряду с индукцией апоптоза по сравнению с отдельными агентами

Для того чтобы расследовать ли ОПУ, сульфорафан и кверцетин, отдельно или в сочетании, могут повлиять на жизнеспособность, апоптоз и миграцию потенциал, Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки обрабатывали, как описано выше. Девяносто шесть часов спустя над(Ф)H содержание была обнаружена МТТ-теста, который отражает жизнеспособность (). А одиночные агенты сильно угнетается жизнеспособность, комбинации стали сильнее (Рис. 4А). Кроме того, ранний апоптоз индуцируется в МВД-PaCa2 клетки одиночные агенты, а комбинации были более эффективны, как измеряется аннексин окрашивания и цитофлуориметре facs-анализа (фиг. 4Б). Сопоставимые результаты были получены при измерении позднего апоптоза путем окрашивания клеток с йодидом пропидия и анализа движений. Сочетание изотиоцианат с полифенолами оказал более выраженный эффект, чем сочетание двух полифенолов, в то время как все комбинации были значительно сильнее, чем однократная обработка (Рис. 4С). Получить знания о том, диетические вещества также тормозят миграционный потенциал, мы выполнили бойден палаты пробирного. Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки были обработаны одиночные агенты или их комбинации и 24 ч спустя живых клеток в 10% ФТС было введено в верхнюю камеру и 1 или 10% ФТС были добавлены в нижнюю палату. Переселение клетки анализировали 18 ч и число клеток высевали в верхний отсек был установлен на 100%. Каждый компонент значительно ингибирует миграцию в то время как общее воздействие было сильнее, с уклоном в сторону 1% ФТС, по сравнению с уклоном в сторону 10% ФТС. Однако комбинации являются наиболее эффективными в обеих клеточных линий и с градиентами (Рис. 5А). Соответственно, РНК экспрессии матриксных металлопротеиназ ММП-2 и ММП-9 было приостановлено с сильные эффекты при комбинированной терапии (Рис. 5Б). Эти данные свидетельствуют о том, что комбинации кверцетина, сульфорафан и GTC ознакомления панкреатических раковых клеток в апоптоз и угнетают их понаставил сильнее каждого отдельного агента.

Рис. 4
Комбинации биологически активных агентов превосходят в снижении жизнеспособности и индуцируя апоптоз по сравнению с отдельными агентами. (А) Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки обрабатывали, как описано на рис. 2Б. Девяносто шесть часов жизнеспособность была обнаружена МТТ-теста. (Б) ...
Рис. 5
Комбинации биологически активных агентов превосходят по сокращению миграции и матриксной металлопротеиназы выражении по сравнению с отдельными агентами. (А) Миа-PaCa2 и BxPc-3 клетки обрабатывали, как описано на рис. 2Б. Двадцать четыре часа спустя среднесрочной был изменен на ...

Комбинация биологически активных агентов усиливает выражение mir-давайте-7а связан с угнетением к-рас сильнее, чем одиночные агенты

Миа-PaCa2, BxPC-3, основной КПК клеток PacaDD-183 и crl 1097 доброкачественные клетки протоков ПЖ угощали диетические вещества по отдельности или в сочетании и 72 ч в последствии выражением мир-пусть-7а и его целевого Гена к-RAS был осмотрен ПЦР. Одной процедуры значительно усиливается экспрессия мир-давайте-7а, но тормозится экспрессия к-рас в 3 злокачественные клетки с сильные эффекты после комбинированного лечения (Рис. 6А и Б). В отличие от индукции мир-пусть-7а выражение наряду с торможением к-РАН выражения были минимальны при доброкачественных СЛС 1097 клеток, как и ожидалось. Кроме того, базальные выражение mir-давайте-7а была ниже в злокачественных клетках сравненных к Non-злокачественных клеток (данные не показаны). Сильное ингибирование к-RAS в раковых клеток только было подтверждено вестерн-блот анализа (Рис. 6с). Эти данные показывают, что сульфорафан, кверцетин и GTC опосредуют индукцию мир-давайте-7а выражение, которое, в свою очередь, блокирует к-рас выражения и особенности ЦОК при раке поджелудочной железы.

Рис. 6
Комбинации биологически активных агентов превосходят в повышении выражение mir-давайте-7а наряду с ингибированием Гена-мишени, к-РАН по сравнению с отдельными агентами. Миа-PaCa2, BxPc-3, начальное ПДА клеток (PacaDD-183) и доброкачественные клетки протоков ПЖ ...

Обсуждение

Учитывая все разрушительные прогноз у больных с раком поджелудочной железы, мы оценивали в данном исследовании экспериментальная стратегия сочетания биоактивных пищевых агентов для ликвидации ЦОК. Мы протестировали эффективность кверцетина, сульфорафан и GTC ингибировать самообновления, потенциал, резистентность к апоптозу и миграционный потенциал и обнаружили, что комбинация биоактивных добавок является более эффективным, чем каждого отдельного вещества. Кроме того, мы обращались ли индукцию мир-давайте-7а наряду с ингибированием его Гена-мишени, к-РАН обошлось. Нам показывают, что сульфорафан, кверцетин и egcg и сильно тормозят формирование колонии и показывают, что катехины ЭКГ и ХГ являются даже более эффективными, чем хорошо изучила ЭГКГ. Чтобы имитировать природный состав катехинов зеленого чая, все последующие опыты проводили с очищенным экстрактом зеленого чая (ОПУ). ОПУ эффективно подавляли самообновления потенциал, о чем свидетельствует колонии и формирования сфероида, а также активность ALDH1, но в сочетании с сульфорафан или кверцетин увеличили эффект. Аналогичные результаты были получены на резистентность к апоптозу, миграционный потенциал и экспрессию матриксных металлопротеиназ. Самое главное, наши данные свидетельствуют о том, что комбинация сульфорафана или кверцетин с ОПУ активирует выражение mir-давайте-7а наряду с ингибированием к-рас-выражение гораздо сильнее, чем одиночные агенты. Потому что регуляция мир-давайте-7а и подавление к-РАН был специфичен для раковых клеток и произошла только минимально в доброкачественные клетки протоков ПЖ, эти данные свидетельствуют о том, раковая клетка-конкретное действие оценивали биологически активных веществ.

Это исследование предоставляет данные, чтобы поддержать предположение, что мир-let7a-опосредованное ингибирование к-РАН выражения напрямую опосредует наблюдается угнетение функций CSC. В согласии с данных, полученных из мышиных моделях рака легких и толстой кишки, онкогенные к-РАН ускоряется прогрессирование опухоли путем введения незрелых стволовых-как государство, в котором дифференциация запрещено (рассматривается в справ. ). Убедительные доказательства того и существует, для к-рас-индуцированной перепрограммирования панкреатических ацинарных клеток в протоковой интраэпителиальной неоплазии, а также гистологически определяемые предшественником КПК (). Недавнее исследование показывает, прямого перепрограммирования клеток мыши на условное выражение, к-РАН () и было заключено, что номера-ЦОК имеют потенциал, чтобы dedifferentiate и приобретают свойства стволовых клеток, что является прямым следствием к-рас-индуцированной пластичности. Это позволяет сформировать ЦОК с высоким метастатическим потенциалом в любое время прогрессирование рака, или наоборот, восстановление стволовых клеток фенотипа существующих ЦОК в любой момент в развитии рака и прогрессии.

Мы обнаружили, что катехины зеленого чая ЭКГ и кг являются более эффективными, чем ЭГКГ в ингибирование образования колонии высокоагрессивных и CSC обогащенный КПК клеточной линии МВД-PaCa2. В предыдущем исследовании () уже показали, что ЭКГ и CG оказывают гораздо сильнее анти-пролиферативной и противовоспалительной активности на ПДА, установленных клеточных линий PancTu-я, Panc1, Panc89 и BxPc-3, чем наиболее широко изученный катехин egcg. Кроме того, в пробирке данные подтверждаются недавно в вивоосвидетельствование, в котором ЭГКГ ингибировал рост orthotopically насаждается поджелудочной железы человека Panc1 ксенотрансплантат мышей balb/C в ню мышей (). Самое главное, в последнем прижизненно изучать, никакие очевидные побочные эффекты ЭГКГ у мышей не наблюдалось. Эти данные соответствуют нашим наблюдением раковой клетки-специфической индукции мир-давайте - 7а и ингибирование к-РАН. В нашем исследовании приведены данные в поддержку гипотезы, что противоопухолевый эффект в естественных условиях будет гораздо более выраженным при использовании общего катехины зеленого чая в сочетании с сульфорафан или кверцетин.

Мы отметили, что сочетание изотиоцианат сульфорафан с полифенолами зеленого чая была аналогична или немного выше, в ингибировании самообновления потенциал, чем сочетание полифенолы зеленого чая с полифенолами кверцетин. Это наталкивает на догадки что это могло быть благодаря выявлению идентичных путей, биоактивные вещества со сходной химической структуры. Соответственно, комбинации биологически активных агентов различной химической структуры, могут быть более эффективными, чем, например, сочетание двух различных полифенолов, потому что более широкий спектр противоопухолевой путей может быть вызвано. Последние данные, что полифенолы, ресвератрол, генистеин и куркумин обладает анти-ЦОК деятельности () совместно с нашими данными подчеркивает, что биологически активные полифенолы, должны сочетаться с химически различных растительных веществ с Анти-ЦОК активности для активации широкого спектра клеточных сигнальных путей. Кроме сульфорафана и других изотиоцианаты, на дитерпеноида triepoxide triptolide перспективным может быть сочетание партнера. Triptolide имеет долгую историю в традиционной китайской медицине для лечения ревматоидного артрита и рака и его получают из винограда-как растение Tripterygium wilfordii крюк F (). В нашем предварительном исследовании мы показали, что triptolide эффективно ингибирует фактор NF-κb деятельности, эпителиально-мезенхимальный переход и стебля-подобные функции в ПДА клеток ().

Что касается повышенной активности мир-давайте-7а после лечения сульфорафан, кверцетина и катехины зеленого чая, эти данные похожи на недавнее понятие, что куркумин-индуцирует мир-давайте-7а выражение (). Кроме того, усиление активности микрорнк-210 может внести свой вклад, который наблюдался после обработки ЭГКГ, и это подавляет рост клеток рака легких (). Также, мирна-30б может быть вовлечен, потому что это приводит к негативной регуляции при лечении рака печени HepG2 клеток с ЭГКГ (). Кроме того, Кресс-производные phenethyl-изотиоцианат приводит к негативной регуляции микрорнк-141, который подавлял экспрессию андрогеновых рецепторов и уровень пса в простаты линий раковых клеток (). В другом исследовании, Шан и соавт. продемонстрировали индукцию микрорнк-200С по сульфорафан в мочевом пузыре раковые клетки и это ингибировал ЦОГ-2, эпителиально-мезенхимальный переход и ММП-2 и -9 выражение (). В этом отношении предыдущие исследования, включая наши собственные добавить важную информацию на растущий объем доказательств того, что пищевые вещества могут предотвратить рак с помощью эпигенетических сигналов. Будущие исследования должны рассмотреть влияние на эпигенетические диета для наличие отдельных биологически активных веществ для профилактики и лечения рака (). Действительно, предыдущие исследования показали, что химиопрофилактические пищевые полифенолы и изотиоцианаты могут нейтрализовать генетические дефекты эпигенетической регуляции, что является потенциальной причиной почему этих веществ, ослабляются процессы онкогенеза, прогрессии и метастазирования, а также для лечения наркозависимости (,). Такие эпигенетической регуляции не только включить изменение экспрессии микрорнк, но может также включать изменения гистонов ацетилирование и метилирование промотора.

Вместе, поступательное вывод из нашего исследования является то, что определенная диета, состоящая из фруктов и овощей с экспериментально проверенной анти-ЦОК деятельность может быть весьма эффективной профилактики опухолевого роста и прогрессии.

Ссылки

1. Гуковская как, Pandol СЖ. Пути гибели клеток при панкреатите и раке поджелудочной железы.Pancreatology. 2004;4:567-586. [В pubmed]
2. Tuveson да, Neoptolemos ДЖП. Понимание метастазирование при раке поджелудочной железы: вызов для новых клинических подходов. Клетки. 2012;148:21-23. [В pubmed]
3. Рашид З, Ковальски Дж, Смит БД Мацуи в. Краткий обзор: новые концепции в клинической нападения на раковые стволовые клетки. Стволовые Клетки. 2011;29:883-887.[РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
4. Симеоне ДМ. Панкреатические раковые стволовые клетки: последствия для лечение рака поджелудочной железы. Клиник Рак Рез. 2008;14:5646-5648. [В pubmed]
5. Лапидот Т, Sirard с, Vormoor Дж Мердок Б, Хоанг т., Касерес-Кортес Джей, Минден М, Патерсон Б, Калиджури мА, хер ЙЕ. Клетки инициируя человека острого миелоидного лейкоза после трансплантации в мышей scid. Природа. 1994;367:645-648. [В pubmed]
6. Аль-хадж М, Виха МС Бенито-Эрнандес а Моррисон СЖ, Кларк МФ. Проспективное выявление опухолевый клеток рака молочной железы. Труды Национальной Академия Наук США.2003;100:3983-3988. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
7. Сингх СК, Хокинс с, Кларк ИД, Сквайр йа, Байани Дж, скрыть Т, Henkelman РМ, Кузимано, д. м. н., Кортики ПБ. Идентификация человеческого мозга опухоль инициирующих клеток. Природа.2004;432:396-401. [В pubmed]
8. Сильверман ДТ, Свонсон Калифорния, Гридли г, Wacholder С., Гринберг р. с., Браун л., Хейс РБ, Свонсон ГМ, Шенберга нечетных Pottern л., Шварц А. г., и. Ф. Фраумени, Jr, то пылесос РН. Диетические и пищевые факторы и рака поджелудочной железы: исследование случай-контроль на основе прямых опросов. Джей Национальное Рак Инст. 1998;90:1710-1719. [В pubmed]
9. Кирш в. А., Питерс у Мейн ст Субар АФ, Чаттерджи Н Джонсон ГК, Хейс РБ. Проспективное исследование потребления фруктов и овощей и риск развития рака простаты. Джей Национальное Рак Инст. 2007;99:1200-1209. [В pubmed]
10. Ван J, Чжан ж, солнце, я, Ю, Ч, н Ц, Риш га, Гао ЫТЬ. Зеленый чай пить и риска рака поджелудочной железы: масштабного популяционного исследования случай-контроль, в городах Шанхай. Рак Epidemiol. 2012;36:e354–e358. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
11. Герр я, Lozanovski в Хоуб П П Schemmer, Бухлером МВт. Сульфорафан и обзоры горчичного масла в профилактике рака и терапии. Вена Мед Wochenschr. 2013;163:80-88. [В pubmed]
12. Ян СУ, Ван Х. лечение рака сочетание: зеленый чай и и АБС битор фосфодиэстеразы 5? Джей Клин Инвест. 2013;123:556-558. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
13. Сапоги ой, Haenen гр, мочалка А. оздоровительные эффекты кверцетина: от антиоксидантов к нутрицевтикам. Евро И J Pharmacol. 2008;585:325-337. [В pubmed]
14. Kallifatidis г, Рауш в., Бауман в, ООО в, Beckermann БМ Грот а, Маттерн Дж, ли З колб а, Moldenhauer г, Altevogt Р, Вирт Т, Вернер Дж, Schemmer П Büchler МВт, Сальников а, герр И. Сульфорафан целей поджелудочной железы опухоль-инициирующих клеток, фактор NF-kappaB-индуцированной антиапоптотических сигнальных. Гут. 2009;58:949-963. [В pubmed]
15. Рауш в Лю Л Kallifatidis г, Баумана Б, Маттерн Дж, Gladkich Дж, Верт Т, Schemmer П Büchler МВт, Zöller М, Сальников а, герр И. Синергетическое действие сорафениба и сульфорафан уничтожает поджелудочной железы стволовых клеток характеристики. Рак Рез. 2010;70:5004-5013.[В pubmed]
16. Kallifatidis г, Labsch с Рауш в., Маттерн Джей, Джей Gladkich, Moldenhauer г, Büchler МВт, Сальников а, герр И. Сульфорафан повышает лекарственно-опосредованная цитотоксичность в отношении раковых стволовых клеток, поджелудочной железы и простаты. Мол Термо. 2011;19:188-195. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
17. Ли у, Виха МС, Шварц С., Солнечная Д. последствия рака клеточной теории рака химиопрофилактики природных биологически активных соединений. Джей Нутрь Биохимию.2011;22:799-806. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
18. Чжоу ж, Kallifatidis г, Баумана Б, Рауш в., Маттерн Дж, Gladkich Джей, Гиз Н Moldenhauer г, Вирт Т, Бухлером МВт, Сальников А. в., герр И. диетическое полифенол кверцетин целей поджелудочной железы стволовые клетки. Инт Джей Онкол. 2010;37:551-561. [В pubmed]
19. Kurbitz З., Хейз д Redmer Т Гумас Ф Арльт а Лемке Дж, Римбах г, Kalthoff сек, Trauzold А. Эпикатехин галлат эпигаллокатехина катехин и превосходят эпигаллокатехин галлат на подавление роста и противовоспалительные мероприятия в панкреатических раковых клеток. Рак ТСМ.2011;102:728-734. [В pubmed]
20. Бао Б, Али с Банерджи с Ван З Logna Ф Азми как, Гонконг, д Ахмад а, л. г, Падхи с Саркар FН. Куркумин аналог ВПР подавляет рост опухолей поджелудочной железы путем включения микрорнк супрессоров и уменьшения экспрессии EZH2. Рак Рез. 2012;72:335-345. [РМС бесплатно статьи][в pubmed]
21. Гонконг д-Хит Е, Чэнь ж, Шер мл, Пауэлл я, Хейлбруна Л, л. г, Али с Сетхи с Хассан О., Хван с, Гупта Н Читале д Сакр Вашингтон, Менон М, Саркар FН. Потери давайте-7 до-регулирует EZH2 при раке простаты соответствует приобретения раковых стволовых клеток подписи, ослабляется БР-Дим. Биохимия. 2012;7:e33729. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
22. Ли г, VandenBoom ТГ, второй, Гонконг д, Ван Зи, Али с Филип ПА, Саркар FН. Вверх-регулировкой мир-200 и Let-7 природных средств приводит к развороту эпителиальных в мезенхимальные перехода в гемцитабин-резистентных раковых клетках поджелудочной железы. Рак Рез. 2009;69:6704-6712. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
23. Рейнхарт лю, вялый ФДЖ, Бассон М, Pasquinelli А. е., проф. ЙК, Rougvie АЕ Хорвиц час, Ruvkun г. 21-нуклеотидных пусть-7 РНК регулирует развития синхронизации нематод caenorhabditis ЭлегансПрирода. 2000;403:901-906. [В pubmed]
24. Школы-Кершер а слабину ФДЖ. Oncomirs - микрорнк, играющих важную роль в рак. Нат Оборотов Рака. 2006;6:259-269. [В pubmed]
25. Джонсон см, Grosshans ч, Shingara Дж, Байром М, Джарвис Р Ченг а Лабурье Е Рейнерт кл Браун д, натяжные ФДЖ. РАН регулируется позвольте-7 микрорнк семьи. Клетки. 2005;120:635-647.[В pubmed]
26. Наир против Маеда ЛС Иоаннидис ДЖП. Прогнозирования клинического исхода микрорнк при раке человека: систематический обзор. Джей Национальное Рак Инст. 2012;104:528-540.[РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
27. Рюккерта Ф Ауст д, Беме я, Вернер К., Брандт а Диамандис ЕР, Krautz с, Геринг с Saeger HD качестве, Grutzmann Р Pilarsky С. пять основных аденокарциномы поджелудочной железы человека линии клеток установленным следствием способом. Джей Хирургии Рез. 2012;172:29-39. [В pubmed]
28. Николетти я, Migliorati г, Паяцы МК, Grignani Ф Риккарди С. быстрый и простой способ для измерения апоптоза тимоцитов с помощью пропидий йодид окрашивания и проточной цитометрии.Компания J Immunol Методов. 1991;139:271-279. [В pubmed]
29. Рауш в Лю Л Апель а Реттига Т Gladkich Дж, Labsch с Kallifatidis г, Качаровский а Грот а, брутто, Вт, Гебхард мм, Schemmer П, Вернер Дж, Сальников А. в., Zentgraf сек, Бухлером МВт, герр И. Аутофагия опосредует выживание поджелудочной железы опухоль-инициирующих клеток в гипоксическом микроокружении. Журнал Патология Дж. 2012;227:325-335. [В pubmed]
30. Тан ЗП, Фу Джей, Нолл д Rodova М, Шанкар с Шривастава РК. Ингибирование звуковая дорожка ежик и поддержания плюрипотентности факторы регулируют рака поджелудочной железы из стволовых клеток человека, характеристика. Инт Дж Рака. 2012;131:30-40. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
31. Немец Б, Мозер с Kalthoff ч, Торок в ЛОР М, Kloppel G. в комплексной характеристике поджелудочной железы протоковый рак клеточных линий: на пути к созданию в лабораторных условиях исследовательской платформы. Virchows Арки. 2003;442:444-452. [В pubmed]
32. Лю л., Сальников А. в., Бауэр Н Александрович Е Labsch с Nwaeburu с, Маттерн Дж, Gladkich Дж, Schemmer П, Вернер Дж, герр И. Triptolide переворачивает гипоксии-индуцированной ЕМТ и стебля-подобные функции в поджелудочной рака самолетов NF-каппа B подавление. Инт Дж Рака.2014;134:2489-2503. [В pubmed]
33. Vistica ДТ, Скехан П Scudiero д, монахи, Питтман а, мистер Бойд Тетразолием анализах клеточной жизнеспособности: критический анализ отдельных параметров, влияющих формазана производства. Рак Рез. 1991;51:2515-2520. [В pubmed]
34. Ищенко я, жи Дж, Молл ум, Nemajerova а, Петренко О. прямого перепрограммирования онкогенного RAS и усил. Труды Национальной Академия Наук США. 2013;110:3937-3942.[РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
35. Шанкар с Марш Л Шривастава РК. ЭГКГ подавляет рост опухолей поджелудочной железы человека orthotopically имплантировали в мышей balb с ню мышей посредством модуляции FKHRL1/FOXO3a и neuropilin. Моль Клеточной Биохимии. 2013;372:83-94. [РМС бесплатно статьи][в pubmed]
36. Бринкер АМ, Ма Джей, Липский ЧП, Раскин И. медицинской химии и фармакологии родаTripterygium(Celastraceae) Фитохимии. 2007;68:732-766. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
37. Ван сек, Биан с Ян в CS. Зеленый чай полифенола ЭГКГ подавляет рост клеток рака легких через upregulating мир-210 выражения вызвана стабилизации установлено, что hif-1alpha.Канцерогенеза. 2011;32:1881-1889. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
38. Арола-Арнал а лезвие С. Проантоцианидины модуляции экспрессии микрорнк человека HepG2 клеток. Биохимия. 2011;6:e25982. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
39. Сяо Джей, Гонг Ай, Eischeid АН Чен д, Дэн с, молодой ТИЦ, Чэнь хм. мир-141 регулирует андрогенов транскрипционной активности раковых клеток предстательной железы человека с помощью ориентированных на малый партнер гетеродимерный белок. Простаты. 2012;72:1514-1522. [В pubmed]
40. Г-Шань, Чжан Л, Бао г, л. б, он с, Гао М, Х Фэн, Сюй Ю, Чжан х, Ван С. Эпителиально-мезенхимального перехода, роман целевой сульфорафан через ЦОГ-2/MMP2, 9/Улитка, ZEB1 и mir-200С/ZEB1 пути в человеческом мочевого пузыря раковые клетки. Джей Нутрь Биохимию.2013;24:1062-1069. [В pubmed]
41. Харди ТМ Tollefsbol для. Эпигенетическая диета: влияние на эпигеном и рак. Epigenomics.2011;3:503-518. [РМС бесплатно статьи] [в pubmed]
42. Из vanden Berghe в. Эпигенетические воздействия биологически активных полифенолов рака химиопрофилактики: непрерывное ремоделирование наш эпигеномов. Pharmacol Резолюции2012;65:565-576. [В pubmed]
43. Gerhauser С. Эпигенетические влияния диетических изотиоцианаты рака химиопрофилактики.Карр Опин Клин Нутрь Metab Ухода. 2013;16:405-410. [В pubmed]

 

Яндекс.Метрика

Оставить комментарий

Комментарии: 0